ポリヒスチジンタグはサイズが小さいこと、免疫原性が低いこと、天然条件や変性条件、さらには界面活性剤や各種の添加剤の存在下でも安定であることから、アフィニティタグとして広く使用されています。
Cube Biotech社ではHisタグタンパク質の精製用の高パフォーマンスPureCube
IDAアガロースを提供しております。
✔ 結合容量は最大50 mg/mL
✔ 優れたDTTおよびEDTAに対する安定性
✔ 再使用のために再生可能
✔ 検出用抗Hisタグ抗体の提供も可能
また、キレートリガンドとしてNTAを使用したレジンや、Ni/Co以外の金属を配位したレジンもご提供可能です。
特定の金属を配位したIMACレジンについての詳細な説明は以下のリンクをご参照下さい。また、その他の金属を配位したIMACレジンをご希望の場合はお問い合わせ下さい。
注： PureCube IDAアガロースは50%サスペンジョンとしてお届けします。PureCube IDAアガロース（ご希望の金属イオンを配位可能です）は充填済クロマトグラフィーカラムとしてもお届け可能です。キレートリガンドとしてNTAを使用したレジンもご提供可能です。(NTAとIDAの違いについてはこちら)
注： Hisタグタンパク質の培養上清からの精製やプルダウン実験ではPureCube Hisアフィニティ磁気ビーズをご使用になることをお勧めします。ウェスタンブロットでのHisタグタンパク質検出用にタグ特異的抗体もご用意しております。
優れたパフォーマンス
多孔性かつ物理的安定性に優れているアガロースレジンを使用しているため、PureCube
Ni-IDAアガロースは市場で広く用いられている競合製品より優れた、レジン1mLあたり50
mgのタンパク質を結合する能力があります。
図1. は大腸菌で発現されPureCube
Ni-IDAまたは競合のNi-Sepharoseハイパフォーマンスレジンを充填したグラビティフローカラムで精製された6-His
chloramphenicoltransferase (CAT)のSDS-PAGEの結果が示されています。
2種類のレジンを使用して精製された5つの溶出フラクションから回収されたタンパク質の量は同等です(CL:
沈殿物・顆粒除去後ライセート、FT: フロースルー、W1-2:
洗浄フラクション、E1-5: 溶出フラクション)。
表1. はPureCube
Ni-IDAアガロースと2種類の競合製品について、その他の性能を比較した結果です。
試薬や添加物への化学的耐性
還元剤DTTや金属キレート剤EDTAがPureCube
Ni-IDAアガロースの結合容量に与える影響が調べられています。
レジンを様々な濃度の2種類の試薬に1時間暴露した後、HisタグGFPを精製しました。結合容量は試薬の濃度が増加するにつれて減少しますが、減少率はDTT存在下の方が小さく（全体で30%の減少）、また1mMまでのEDTA存在下ではそれ以上の濃度と比較して小さく（20%減少）なっています。
表1. はPureCube Ni-IDA アガロースと競合2製品の安定性をまとめた結果です。
再使用のための再生可能レジン
DTTのような強力な還元剤はニッケルイオンを還元し、レジンの色が茶色に変化します。PureCube
Ni-IDA アガロースは5 mM
DTTにも耐性があり、タンパク質を結合可能です（B）。
さらに、レジンは再生可能です。図3. ではPureCube Ni-IDAアガロースは5mM
DTTに8時間さらされました（A）が、依然としてGFPを結合可能でした
（B）。
レジンを再生するためにキレートリガンドからニッケルを除去しするとレジンは白色となり（C）、再度ニッケルイオンを配位するとレジンは特徴的な青緑色を呈します
（D）。
高品質かつ最良のパフォーマンスを示す材質
PureCube Ni-IDAアガロースは高度にリンクされたアガロースであり、物理的に安定かつ低圧下での精製プロセスに最適です。
カラムクロマトグラフィーのみでなく、バルク精製にも適しています。さらにレジンは高度に多孔性がありサイズの均一性に優れているため、タンパク質との相互作用に有利であり、各回ごとの再現性にも優れています。
表1. はPureCube Ni-IDAアガロースおよび市場で広く使用されている2種類のレジン製品の仕様および性能をまとめたものです。
表1. 3種類のNi-IDAアガロースレジンの仕様および性能
| |
Cube Biotech |
Competitor G |
Competitor S |
| 粒径 |
32-60 μm |
average 90 μm |
45-160 μm |
| 金属イオン結合量（Cu、Ni） |
> 25 μmol/mL |
> 30 μmol/mL |
6-18 μmol/mL |
| 結合容量 |
50 mg/mL |
No information |
< 15 mg/mL |
| 安定なpH範囲(processing) |
3.0-12.0 |
3.0-13.0 |
No information |
| 推奨流速 |
0.5-2.0 mL/min (6.0 mL/min poss.) |
1.0 mL/min |
1.0 mL/min |
| 安定なDTT 範囲 |
< 10 mM |
No information |
5 mM |
| 安定なEDTA範囲 |
< 1.0 mM |
No information |
Not recommended |
IDAアガロースレジン製品リスト
表2. IDAアガロースレジン製品リスト
| カタログ番号 |
製品名と内容 |
| ニッケル配位アガロース |
|
| 30101 |
PureCube Ni-IDA Agarose (1 mL) 2 mL 50% suspension |
| 30103 |
PureCube Ni-IDA Agarose (10 mL) 20 mL 50% suspension |
| 30105 |
PureCube Ni-IDA Agarose (50 mL) 100 mL 50% suspension |
| 30110 |
PureCube Ni-IDA Agarose (250 mL) 500 mL 50% suspension |
| 30112 |
PureCube Ni-IDA Agarose (500 mL) 1000 mL 50% suspension |
| コバルト配位アガロース |
|
| 30401 |
PureCube Co-IDA Agarose (1 mL) 2 mL 50% suspension |
| 30403 |
PureCube Co-IDA Agarose (10 mL) 20 mL 50% suspension |
| 30405 |
PureCube Co-IDA Agarose (50 mL) 100 mL 50% suspension |
| 30410 |
PureCube Co-IDA Agarose (250 mL) 500 mL 50% suspension |
| 30412 |
PureCube Co-IDA Agarose (500 mL) 1000 mL 50% suspension |
| 無配位アガロース |
|
| 30701 |
PureCube IDA Agarose (1 mL) 2 mL 50% suspension |
| 30703 |
PureCube IDA Agarose (10 mL) 20 mL 50% suspension |
| 30705 |
PureCube IDA Agarose (50 mL) 100 mL 50% suspension |
| 30710 |
PureCube IDA Agarose (250 mL) 500 mL 50% suspension |
| 30712 |
PureCube IDA Agarose (500 mL) 1000 mL 50% suspension |
| 抗Hisタグ抗体 |
|
| 40040 |
PentaHis Antibody* (0.1 mg) BSA-free lyophilized * manufactured by QIAGEN |