ノックダウン細胞作製について

遺伝子のノックダウンについて

当社では、SIRION BIOTECH社の日本におけるパートナーとして、お客様の指定された細胞に対して、ご指定のターゲット遺伝子が高効率でノックダウンされた細胞の作製の受託を行っております。

同社の技術やノウハウを活用することで、従来はノックダウンが困難であった細胞/遺伝子に対しても高効率でノックダウンされた細胞を短期間に作製可能です。

アデノウイルスによるノックダウン細胞

応用分野

非分裂細胞やプライマリ細胞のように限定的な増殖能力を持つ細胞に適しています。

下記のような分野で応用できます。

▶ 遺伝子機能の研究(最長10日間安定にノックダウン可能)

▶ 創薬ターゲットの同定、バリデーション

▶ 安定的ノックダウン細胞作製前のテスト

▶ 遺伝子強制/過剰発現でのバックグラウンド除去


サービス概要

▶ ターゲット遺伝子に対するshRNAのアデノウイルスベクターへの組み込み

▶ お預かりしたプライマリ細胞または細胞株へのshRNA組み込みベクターの導入

▶ 配列解析による組み込み成功の確認

▶ 抗生物質を用いた選択による細胞プールの構築

▶ 導入後48時間時点の細胞を凍結しお届け

▶ 遺伝子のノックダウンはqRT-PCRまたはウェスタンブロットにより、コントロール細胞と比較し定量化

▶ non-target shRNAを発現するコントロール細胞もあわせてお届けいたします。

▶ shRNAのデザインからやアデノウイルスベクター/アデノウイルスの作製から承ることも可能です。

▶ 組織の入手とプライマリ細胞の分離/またはプライマリ細胞や細胞株の入手から承ることも可能です。


特徴

柔軟性:用途に合わせたプロモータやエンハンサー等の柔軟なデザインが可能です。

広範囲の適用性:従来は遺伝子導入およびノックダウンが困難とされていた細胞を含むほぼすべてのセルタイプにおいて、効率的かつ定量的なshRNAのデリバリーと均一なノックダウンが可能です。

高効率ノックダウン:ほとんどの細胞型において、高効率ノックダウンが可能です。(99%以上のノックダウンを実現した例もございます。)

✔ ノックダウン保証:

事前にでお客様と合意した効率以上のmRNAレベルのノックダウンを保証します。

定量性:ウイルス量の調節により、ノックダウンの程度を調節可能です。

バイオセーフティ―:細胞はウイルスフリーでお届けします。

短納期:バリデーション済ノックダウン細胞をshRNA配列のお預かりから6週間以内にご提供可能です。

簡便性:到着してすぐにお使いいただけるバリデーション済み凍結細胞の形でお届けいたします。

レンチウイルスによるノックダウン細胞

応用分野

下記のような分野で応用できます。

▶ 遺伝子機能解析

▶ ターゲットの同定とバリデーション

▶ タンパク質等の生体物質生産の際のバックグラウンド除去

▶ 創薬スクリーニング

▶ 病態モデル等の細胞モデルの構築

▶ がん研究における細胞移植モデル


サービス概要

▶ ターゲット遺伝子に対するshRNAのレンチウイルスベクターへの組み込み

▶ 配列解析によるサブクローニング成功の確認

▶ お預かりした細胞へのshRNA組み込みベクターを導入

▶ 抗生物質を用いた選択による、安定な細胞プールの構築

▶ 遺伝子のノックダウンをqRT-PCRまたはウェスタンブロットにより、コントロール細胞と比較して定量化

▶ non-target shRNAを発現するコントロール細胞もあわせてお届けいたします。

▶ shRNAのデザインからやアデノウイルスベクター/アデノウイルスの作製から承ることも可能です。

▶ 組織の入手とプライマリ細胞の分離/プライマリ細胞や細胞株の入手から承ることも可能です。


特徴

柔軟性:用途に合わせたプロモータやエンハンサー等の柔軟なデザインが可能です。

広範囲の適用性:従来は遺伝子導入およびノックダウンが困難とされていた細胞を含むセルタイプにおいて、効率的かつ定量的なshRNAのデリバリーと均一なノックダウンが可能です。

高効率ノックダウン:ほとんどの細胞型において、高効率ノックダウンが可能です。

ノックダウン保証:事前にでお客様と合意した効率以上のmRNAレベルのノックダウンを保証します。

✔ バイオセーフティ―:

細胞はウイルスフリーでお届けします。

短納期:shRNA配列の合成/お預かりから、バリデーション済みックダウン細胞プールを6週間以内にご提供可能です。

簡便性:到着してすぐにお使いいただけるバリデーション済み凍結細胞の形でお届けいたします。

プラスミドによるノックダウン細胞

応用分野

下記のような分野で応用できます。

▶ 遺伝子機能解析

▶ ターゲットの同定とバリデーション

▶ タンパク質等生体物質生産の際のバックグラウンド除去

▶ 創薬スクリーニング

▶ 病態モデル等の細胞モデルの構築


サービス概要

▶ ターゲット遺伝子に対するshRNAの組み込み

▶ 配列解析による組み込み成功の確認

▶ お預かりした細胞へのプラスミドの導入

▶ 抗生物質を用いた選択による、細胞プールの構築

▶ 遺伝子のノックダウンをqRT-PCRまたはウェスタンブロットによる、コントロール細胞と比較した定量化

▶ non-target shRNAを発現するコントロール細胞もあわせてお届けいたします。

▶ shRNAのデザインからやアデノウイルスベクター/アデノウイルスの作製から承ることも可能です。

▶ 組織の入手とプライマリ細胞の分離/プライマリ細胞や細胞株の入手から承ることも可能です。


特徴

柔軟性:用途に合わせたプロモータやエンハンサー等の柔軟なデザインが可能です。

短納期:shRNA配列解析から、バリデーション済みノックダウン細胞プールを6週間以内に提供可能です。

簡便性:到着してすぐにお使いいただけるバリデーション済み凍結細胞の形でお届けいたします。

TET誘導可能な安定的なノックダウン細胞

応用分野

下記のような分野で応用できます。

▶ 空間的(例えば特定の器官内等)あるいは時間的なノックダウンのコントロールが必要な場合

▶ 標的遺伝子のノックダウンが細胞成長または活性に悪影響を与えるとき


サービス概要

▶ ターゲット遺伝子ノックダウンshRNA遺伝子のTET-inducibleベクターへの組み込み

▶ DNA配列解析による、クローニングの成功の確認

▶ 得られた発現ベクターまたはプラスミドを細胞へ導入

▶ 抗体物質を用いた選択による細胞プールの作製

▶ qRT-PCR又はウェスタンブロッティング法を使った遺伝子発現の定量解析


特徴

✔ プロモータやエンハンサー等を用途に合わせてデザイン可能です。

✔ Dox(Doxycycline)非存在下ではきわめてバックグラウンド発現が低く、Dox存在下ではmRNAと蛋白レベルの双方で、強く発現します。

✔ 導入遺伝子の発現やターゲット遺伝子のノックダウンによる影響を最小限に抑えることが可能です。

細胞のご使用に際して別途TET Systems社へのライセンス料が必要となる場合がございます。詳細はお問い合わせください。


TETノックダウン

図.1 TET誘導可能なノックダウン

イージーオーダーノックダウン細胞 -Mission Cell-

応用分野

下記のような分野で応用できます。

▶ 遺伝子機能解析

▶ ターゲットの同定とバリデーション

▶ がん研究における組織移植モデル


SIRION BIOTECH社ではSigma-Aldrich社との提携により、同社の持つMission shRNAライブラリを利用したレンチウイルスによるノックダウン細胞の作製サービスを提供しております。

サービス概要

SIRION BIOTECH社ではSigma-Aldrich社との提携により、レンチウイルスを用いた安定的に高効率ノックダウン可能な細胞を短期間でお届けすることが可能です。

細胞は全てウイルスフリーであることを確認いたしますので、取扱いに際しての危険性を軽減することが可能です。

セルプールはSigma-Aldrich社の保有するshRNAレンチウイルスライブラリー MISSION TRC-1およびTRC-2を用いて作製されます。

1種類の遺伝子に対し、4~5種類のセルプールをお届けします。


特徴

安全性:ウイルスフリーで取扱い可能です。

最新の技術:レンチウイルスに関する最新の技術による効果を享受できます。

迅速さと信頼性:迅速な作製と信頼できる結果が得られます。

豊富な種類:ゲノム全体にわたり、30,000種以上のヒト、マウスおよびラット遺伝子をカバーしています。

カスタマイズ:ご希望の細胞株に対して最適化した条件で形質転換/培養を行います。使用できる凍結細胞です。


モノクローナル化 -サービス概要-

▶ 作製したセルプールから、単一クローン化されたハイ・パフォーマーをお届けします。

▶ 単一クローンの数は10種類、50種類、100種類から選択していただけます。

▶ ハイ・パフォーマーはqRT-PCRにてノックダウン効率を測定することにより同定します。

▶ 成長率や長期培養時の発現安定性をチェックし、お届けします。


特徴

✔ ノックダウン効率が高いセルをモノクローナル化することにより、セルプールの不均一性によるノックダウン効率の低下を抑えられます。

✔ 発現の安定性を確認いたしますので、細胞株の不均一化が抑えられます。

✔ 安定かつ均一なセルバンキングが可能となります。

✔ マーカー遺伝子の発現プロファイルやジェノタイピング、遺伝子組み込み部位のゲノムマッピング等の情報をオプションでご提供可能です。