免疫学のためのツール

ビオチン化試薬ならびにビオチン-/ストレプトアビジン - ペルオキシダーゼコンジュゲート、dPEG商標™の技術を用いた二次抗体をご紹介しております。



ビオチン化試薬

アビジン-ビオチン相互作用の高い親和性および特異性は、免疫学、組織化学やアフィニティークロマトグラフィーなど数多くの用途に利用されてきました。

ビオチン化は、そのままでは検出が難しい分子を標識されたビオチン結合タンパク質またはアフィニティー結合マトリックスと結合可能にすることによってバイオプローブに変換するための一般的な技術です。

抗体をビオチン化試薬を用いて”タグ付け”し、細胞または組織に含まれる抗原やハプテンを検出するために使用することも可能です。


表1. ビオチン化試薬関連製品リスト
コード 製品名 分子式 CAS 分子量 内容量 名称
LS-1070.0005 D-Biotin C10H16N2O3S 58-85-5 244.31 5g Hexahydro-2-oxo-1H-thieno[3,4-d]imidazole-4-pentanoic acid
LS-1070.0025 D-Biotin C10H16N2O3S 58-85-5 244.31 25g Hexahydro-2-oxo-1H-thieno[3,4-d]imidazole-4-pentanoic acid
LS-1070.0100 D-Biotin C10H16N2O3S 58-85-5 244.31 100g Hexahydro-2-oxo-1H-thieno[3,4-d]imidazole-4-pentanoic acid
PEG2550.1000 Biotin-Sar-OH C13H21N3O4S 154024-76-7 717.84 1g N-Biotinylsarcosine
PEG2555.0001 Biotin-2-Abu-OH C14H23N3O4S 917015-56-6 329.52 1g N-alpha-Biotinoyl-2-DL-aminobutyric acid
RL-1006.0001 Biotin-OSu C14H19N3O5S 35013-72-0 341.39 1g N-Hydroxysuccinimidobiotin
RL-1006.0005 Biotin-OSu C14H19N3O5S 35013-72-0 341.39 5g N-Hydroxysuccinimidobiotin
RL-1006.0025 Biotin-OSu C14H19N3O5S 35013-72-0 341.39 25g N-Hydroxysuccinimidobiotin
RL-2020.0001 Biotin-Ahx-NHS C20H30N4O6S 72040-63-2 454.54 1g 6-Biotinylamino-hexanoic acid-N-hydroxysuccinimidyl ester
RL-2020.0005 Biotin-Ahx-NHS C20H30N4O6S 72040-63-2 454.54 5g 6-Biotinylamino-hexanoic acid-N-hydroxysuccinimidyl ester
RL-2020.0025 Biotin-Ahx-NHS C20H30N4O6S 72040-63-2 454.54 25g 6-Biotinylamino-hexanoic acid-N-hydroxysuccinimidyl ester
RL-2025.0001 Biotin-Ahx-OH C16H27N3O4S 72040-64-3 357.47 1g 6-Biotinylamino-hexanoic acid
RL-2025.0005 Biotin-Ahx-OH C16H27N3O4S 72040-64-3 357.47 5g 6-Biotinylamino-hexanoic acid
RL-2025.0025 Biotin-Ahx-OH C16H27N3O4S 72040-64-3 357.47 25g 6-Biotinylamino-hexanoic acid
RL-8615.0001 Biotin-OPfp C16H15F5N2O3S 120550-35-8 410.36 1g Biotin pentafluorophenyl ester
RL-8615.0005 Biotin-OPfp C16H15F5N2O3S 120550-35-8 410.36 5g Biotin pentafluorophenyl ester
RL-8615.0025 Biotin-OPfp C16H15F5N2O3S 120550-35-8 410.36 25g Biotin pentafluorophenyl ester

PEG2550およびPEG2555は、特に血清サンプルを使用するin vivo検査に最適なビオチニダーゼ耐性で、アミンに対する反応性を持つビオチンPEG化試薬です。

ビオチニダーゼは血漿中に遍在し、血漿中の生体物質の分析の際にビオチンを解離させ、検出系に干渉するおそれがあります。

サルコシンおよび2-アミノ酪酸をスペーサーとして用いることで、アビジンおよびストレプトアビジンへの結合能と結合速度を維持しながらもこの分解反応に対して耐性を持たせることが可能です。

ビオチン-dPEG™試薬

PEGは、エチレングリコールの繰り返し単位からなる分子であり、段階的な重合反応を経て合成されます。

従来の重合技術により合成されるPEGは多分散、もしくは最も成功した場合でも「単分散の高分子の混合物」ですが、dPEG&#8482 は既定の長さを持つ真の単一種類の分子です。

これらの低分子量で親水性を示し、免疫原性を示さない試薬は、重要な数々のアプリケーションに対して有望であることが示されています。

PEGは、タンパク質の溶解性、安定性、および凝集防止性を劇的に改善し、多くの点においてELISA、IHCアッセイ、および製剤のプロセスやアウトプットを改善することができます。

タンパク質のビオチン複合体には、凝集および抗原に対する結合能の低下が見られるものが存在することが知られています。

タンパク質 - ビオチン-IgGの複合体もまた、凝集および沈殿する傾向があり、このことがアッセイを複雑にし、再現性を失ったり、誤った結果が得られてしまう原因ともなります。

これに対してdPEG™リンカーを使用するビオチン化IgGは、凝集を抑え、抗原への親和性を失わず、水に可溶です。


表2. ビオチン-dPEG-NHS試薬関連製品リスト
コード 製品名 分子式 CAS 分子量 内容量 名称
PEG1845.0001 Biotin-dPEG(4)-NHS-(Biotinidase resistant) C29H47N5O11S 1334172-61-0 673.78 1g 18-Biotinamino-17-oxo-4,7,10,13-tetraoxa-16-azaicosan-1-oic acid succinimidyl ester
PEG1845.0100 Biotin-dPEG(4)-NHS-(Biotinidase resistant) C29H47N5O11S 1334172-61-0 673.78 100mg 18-Biotinamino-17-oxo-4,7,10,13-tetraoxa-16-azaicosan-1-oic acid succinimidyl ester
PEG1860.0001 Biotin-dPEG(12)-NHS C41H72N4O18S 365441-71-0 941.09 1g alpha-Biotin-omega-carboxy succinimidyl ester dodeca(ethylene glycol)
PEG1860.0050 Biotin-dPEG(12)-NHS C41H72N4O18S 365441-71-0 941.09 50mg alpha-Biotin-omega-carboxy succinimidyl ester dodeca(ethylene glycol)
PEG1870.0001 Biotin-dPEG(4)-NHS C25H40N4O10S 459426-22-3 588.67 1g 15-Biotinamino-4,7,10,13-tetraoxa-pentadecanoic acid succinimidyl ester
PEG1870.0050 Biotin-dPEG(4)-NHS C25H40N4O10S 459426-22-3 588.67 50mg 15-Biotinamino-4,7,10,13-tetraoxa-pentadecanoic acid succinimidyl ester
PEG4250.0050 Biotin-dPEG™(24)-NHS C65H120N4O30S 365441-71-0 1469.72 50mg alpha-Biotin-omega-(succinimidyl propionate) 24(ethylene glycol)
PEG4250.1000 Biotin-dPEG™(24)-NHS C65H120N4O30S 365441-71-0 1469.72 1g alpha-Biotin-omega-(succinimidyl propionate) 24(ethylene glycol)

PEG1845は、ビオチニダーゼ耐性を持つ2-アミノ酪酸スペーサーとdPEGTMリンカーの利点を兼ね備えた試薬で、ビオチンとストレプトアビジン複合体を形成するのに最適です。

末端カルボニルへのアミドから鎖長は19.2Åで、ストレプトアビジンの結合ポケットに最適な長さです。

また、同じ目的でよく使用されるLC- LCスペーサーと同じ長さを持ち、LC- LCスペーサーが有していた望ましくない疎水性凝集リスクを回避する働きもあります。

このビオチニダーゼ耐性を持つアミン反応性ビオチン化試薬は、血清が使用されているin vivo実験または臨床分析に特に適しています。


表3. ビオチン-PEG-SS-NHS
コード 製品名 分子式 CAS 分子量 内容量 名称
PEG1910.0050 Biotin-dPEG(4)-S-S-NHS C30H49N5O11S3 1260247-51-5 751.93 50mg 1-Biotinamino-15-oxo-3,6,9,12-tetraoxa-19,20-dithia-16-azatricosan-23-oic acid succinimidyl ester
PEG1910.0500 Biotin-dPEG(4)-S-S-NHS C30H49N5O11S3 1260247-51-5 751.93 500mg 1-Biotinamino-15-oxo-3,6,9,12-tetraoxa-19,20-dithia-16-azatricosan-23-oic acid succinimidyl ester

ビオチン-PEG-SS-NHS は一次抗体の標識に有用な試薬です。

細胞溶解液のようなサンプルに対し、ビオチン標識した抗体を加えることで抗原に対し結合し、生成する抗原-抗体複合体は、固定化されたストレプトアビジンと相互作用しサンプルから容易に分離できます。

スペーサーアームに含まれるSS 結合はジチオトレイトール(DTT)などの還元剤によって分解できるため、抗原-抗体の複合体をストレプトアビジンの相互作用を破壊するよりも温和な条件で溶出すことができます。

ビオチン- / ストレプトアビジン - ペルオキシダーゼコンジュゲート

すでに抗体 - ビオチン複合体の例で示されているように、 dPEGTM(12) リンカーはBiotin-ストレプトアビジン - レポーター酵素複合体の性能も向上させます。

さらに、西洋ワサビペルオキシダーゼとの複合体はqSPと呼ばれるより安定したペルオキシダーゼとなり、現在主としてアルカリホスファターゼが検出に使用されている高速ブロッティング製品、例えばI-Blot™に使用可能です。


表4. ビオチン- / ストレプトアビジン - ペルオキシダーゼコンジュゲート関連製品リスト
コード 製品名 分子式 CAS 分子量 内容量 名称
LS-3335.0000 SA-dPEG™(12)-HRP - - - 0mg Streptavidin-Horseradish peroxidase conjugate with hydrophilic dPEGR 12 connection
LS-3340.0000 SA-dPEG™(12)-qSP - - - 0mg Straptavidin-stabilized horseradish peroxidase conjugate with hydrophilic dPEGR 12 connection
LS-3455.0000 Biotin-dPEG™(12)-HRP - - - 0mg Biotin-Horseradish peroxidase conjugate with hydrophilic PEG(12) connection
LS-3460.0000 Biotin-dPEG™(12)-qSP - - - 0mg Biotin-stabilized horseradish peroxidase conjugate with hydrophilic PEG(12) connection

dPEG™の技術を用いた二次抗体

前述のように、 dPEG™リンカー技術は、従来の免疫学的手法に比べ、S/N比や非特異的結合の低減などといった様々な利点が存在します。

標識されたdPEG™を結合した二次抗体のコンジュゲートを使用すれば、二次抗体の標識化をご自身で行う必要はありません。

dPEG™を用いた二次抗体製品は新たな標準となりうる製品として、取り扱いやすく、高パフォーマンスのタンパク質ベースのアッセイを実現します。

ビオチン-抗体コンジュゲート


表5. ビオチン-抗体コンジュゲート関連製品リスト
コード 製品名 分子式 CAS 分子量 内容量 名称
LS-3325.0000 Biotin-dPEG™(12)-GAR IgG (adsorbed) - - - 0mg Biotinylated PEG(12) goat-anti-rabbit antibody
LS-3410.0000 Biotin-dPEG™(12)-GAM IgG (adsorbed) - - - 0mg Biotinylated PEG(12) goat-anti-mouse antibody, adsorbed
LS-3415.0000 Biotin-dPEG™(12)-DAM IgG (adsorbed) - - - 0mg Biotinylated PEG(12) donkey-anti-mouse antibody, adsorbed
LS-3420.0000 Biotin-dPEG™(12)-GAG IgG (adsorbed) - - - 0mg Biotinylated PEG(12) goat-anti-guinea antibody, adsorbed
LS-3425.0000 Biotin-dPEG™(12)-GAH (Fc) IgG - - - 0mg Biotinylated PEG(12) goat-anti-human (Fc) antibody, not adsorbed
LS-3430.0000 Biotin-dPEG™(12)-GAH (Fc) IgG - - - 0mg Biotinylated PEG(12) goat-anti-human (Fc) antibody, not adsorbed

抗体-ペルオキシダーゼコンジュゲート

dPEG技術を用いた二次抗体製品は、西洋わさびペルオキシダーゼおよび安定なペルオキダーゼであるqSPとのコンジュゲートとして販売しております。


表6. 抗体-ペルオキシダーゼコンジュゲート
コード 製品名 分子式 CAS 分子量 内容量 名称
LS-3330.0000 HRP-dPEG™(12)-GAR - - - 0mg Goat Anti-Rabbit-PEG(12)-Horseradish Peroxidase
LS-3435.0000 HRP-dPEG™(12)-GAH (H+L) - - - 0mg Goat Anti-Human-PEG(12)-Horseradish Peroxidase (H+L)
LS-3440.0000 qSP-dPEG™(12)-GAM - - - 0mg Goat Anti-Mouse-PEG(12)-stabilized Horseradish Peroxidase
LS-3445.0000 qSP-dPEG™(12)-GAR - - - 0mg Goat Anti-Rabbit-PEG(12)-stabilized Horseradish Peroxidase
LS-3450.0000 qSP-dPEG™(12)-GAH (H+L) - - - 0mg Goat Anti-Human-PEG(12)-stabilized Horseradish Peroxidase (H+L)